Спектрофотометрією називається спеціальний метод дослідження та аналізу речовин, який заснований на вимірюванні спектрів поглинання в оптичній області електромагнітного випромінювання.
Також під спектрофотометрією можна розуміти розділ фізики, який об'єднав в собі спектроскопію, фотометрію і спектрометрію.
На практиці зазвичай розрізняють спектрофотометрію в ІК, УФ і видимій області спектра. Для вимірювання спектрів використовуються спеціальні прилади-спектрофотометри. Такий прилад складається з джерела випромінювання, диспергуючого елемента, кювети, де міститься досліджувана речовина, а також пристрій, що реєструє.
В УФ області джерелом випромінювання є дейтерієва або воднева лампа, а в ближній ІЧ і видимої областях - вольфрамова лампа розжарювання або галогенні лампи. Фотоелектронні помножувачі та фотоелементи, тобто фоторезистори на основі PbS, служать приймачами випромінювання. Як диспергуючого елемента приладу використовується призменний монохроматор або монохроматор з дифракційними гратами.
Зазвичай спектр виходить в графічній формі, проте в сучасних спектрофотометрах є вбудована міні-ЕОМ, що дозволяє отримати результат в графічній і цифровій формі. Мікропроцесори (або міні-ЕОМ) здійснюють автоматизоване керування приладом і різну математичну обробку отриманих експериментальних даних.
Як правило, спектрофотометри забезпечені спеціальним набором приставок для отримання спектрів відбиття, комфортної роботи зі зразками при високих і низьких температурах, для вимірювання різних характеристик приймачів випромінювання і його джерел.